保健品抗氧化功能檢測

2025年1月，《保健食品原料保健功能聲稱科學證據評價技術指南》團體標準在北京正式發(fā)布，其中抗氧化功能評價被列為重點修訂項目。這一標準的更新，標志著我國保健品抗氧化功能檢測進入"多方法驗證+臨床循證"的新階段。目前，權wei檢測機構已建立起涵蓋化學體外檢測、細胞模型驗證和人體試食試驗的三級評價體系，其中ORAC(氧自由基吸收能力)、DPPH/ABTS自由基清除率、FRAP鐵還原能力及脂質過氧化抑制率測定構成了核心技術矩陣。

化學體外檢測方法的標準化流程

ORAC氧自由基吸收能力測定作為國ji公ren的黃金標準，采用熒光分光光度計(激發(fā)波長485nm，發(fā)射波長520nm)追蹤熒光素探針的衰減曲線，以Trolox當量(μmol TE/g)量化樣品清除過氧自由基的能力。北京中科光析科學技術研究所采用的AOAC Official Method 2012.04標準流程，要求反應體系溫度控制在37±0.1℃，通過恒溫振蕩反應池實現自由基生成速率的穩(wěn)定性控制。該方法能模擬生物體內的鏈式反應過程，檢測范圍覆蓋0~20000μmol TE/g，重復性相對標準偏差(RSD)≤3%。

DPPH與ABTS自由基清除率測定作為快速篩查手段，分別在517nm和734nm波長處監(jiān)測吸光度變化。其中DPPH法操作簡便，30分鐘即可完成檢測，但易受樣品色素干擾;ABTS法則適用于水溶性和脂溶性抗氧化劑的聯(lián)合評價，反應時間縮短至6分鐘。北檢院數據顯示，優(yōu)質葡萄籽提取物的DPPH自由基清除率IC50值通?！?.5mg/mL，而綠茶提取物的ABTS TEAC值可達2.0mmol/g以上。

FRAP鐵還原抗氧化能力測定通過監(jiān)測593nm處Fe2?-TPTZ絡合物的藍色生成量，評估樣品的電子捐贈能力。該方法在pH 3.6的酸性條件下進行，反應溫度37℃，檢測范圍0~10000μmol Fe2?/g。值得注意的是，FRAP法僅能反映還原性抗氧化成分，需與其他方法聯(lián)合使用才能全面評價抗氧化體系。

關鍵儀器操作與質量控制

熒光分光光度計(如島津RF-6000)在ORAC測定中需每日進行激發(fā)/發(fā)射波長校準，確保激發(fā)波長485nm±2nm、發(fā)射波長520nm±2nm的精度控制。自動移液工作站(精度0.1μL)用于實現微量樣品及試劑的高通量精準加樣，避免人為操作誤差。

紫外可見分光光度計(如島津UV-2600)在DPPH/ABTS測定前需進行基線校正，狹縫寬度設置為2nm，掃描速度300nm/min。對于深色樣品，應采用校正公式消除背景干擾：樣品實際清除率=(A0-As)/A0×100%-(A0'-As')/A0'×100%，其中A0'和As'分別為空白溶劑的初始和反應后吸光度。

恒溫振蕩反應池需維持±0.1℃的溫度波動控制，確保過氧自由基生成速率的穩(wěn)定性。在脂質過氧化抑制率測定中，采用硫代巴bi妥酸反應物(TBARS)法，通過532nm處吸光度變化評估丙二醛(MDA)生成量，抑制率≥80%為優(yōu)異指標。

抗氧化成分的定量分析體系

多酚類物質檢測依據GB 5009.268-2016標準，采用Folin-Ciocalteu比色法，在750nm處測定沒食子酸當量(GAE)。樣品經70%乙醇超聲提取(功率200W，時間30min)后，與福林試劑和碳酸鈉溶液反應2小時，檢測范圍0~200mg GAE/g。研究表明，茶多酚含量與ORAC值呈現顯著正相關(r=0.89.p<0.01)。

類黃酮定量采用鋁鹽比色法，在510nm處測定槲皮素當量(QE)。樣品經甲醇-水(7:3)提取后，與亞xiao酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色體系反應，pH值嚴格控制在5.0.該方法線性范圍0~100mg QE/g，回收率95%~105%。

抗氧化酶活性測定涵蓋超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱gan肽過氧化物酶(GPx)等內源性抗氧化系統(tǒng)指標。其中SOD活性采用黃piao呤氧化酶法，在550nm處監(jiān)測氮藍四唑(NBT)光還原的抑制率，單位定義為抑制50%酶活所需的樣品量(U/mg)。

標準方法的選擇與結果判定

根據《保健食品功能檢驗與評價方法(2023年版)》要求，抗氧化功能評價需至少采用兩種方法聯(lián)合驗證。對于原料篩選，可優(yōu)先選擇ORAC法結合DPPH法;產品質控則推薦FRAP法與脂質過氧化抑制率測定的組合方案。人體試食試驗需檢測血清丙二醛(MDA)含量下降率及超氧化物歧化酶(SOD)活力提升幅度，其中MDA下降≥15%且SOD提升≥20%為功能陽性判定標準。

檢測機構資質方面，CNAS認可要求實驗室需通過AOAC 2012.04方法的驗證，包括方法檢出限(LOD≤0.1μmol TE/g)、定量限(LOQ≤0.3μmol TE/g)及加標回收率(80%~120%)等關鍵參數的驗證。每批次樣品需帶陽性對照(Trolox標準品)和空白對照，確保實驗系統(tǒng)有效性。

抗氧化功能檢測已形成從實驗室到臨床的完整證據鏈，未來隨著3D細胞模型和類器官技術的發(fā)展，將進一步提升評價體系的生理相關性。對于企業(yè)而言，選擇通過CNAS認證的檢測機構，嚴格遵循GB 5009.268-2016等國家標準，是確保產品合規(guī)性的關鍵環(huán)節(jié)。